400-1166596 022-23857596
新闻中心 News Center
信息分类
当前位置:首页 > 新闻中心 > 公司动态
有关黄曲霉毒素检测
2018-09-10 14:09

黄曲霉毒素系药典检查项下规定内容,是强烈的致癌物质,因此在食品和药品中需要对其严格把控。其中以黄曲霉毒素B1最多,B2、G1、G2较少。

目前有关的检测方法主要是根据黄曲霉毒素中毒性最大的成分黄曲霉毒素B1B2G1G2能溶于氯仿、甲醇而不溶于己烷、乙醚和石油醚的性质,在紫外灯光下(365nm)观察,分别呈蓝色和黄绿色荧光。或通过薄层色谱,用黄曲霉毒素标准品做对照,根据斑点大小定量。报道的检测方法有薄层色谱法、酶联吸附免疫法、免疫亲和柱-荧光法、免疫亲和柱-HPLC法。


黄曲霉毒素检测品种

黄曲霉毒素(通则2351)

品种(19)

本品每1000g含黄曲霉毒素B1不得过5μg,含黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉毒素B1的总量不得过10μg

陈皮、胖大海、桃仁、柏子仁、莲子、使君子、槟榔、麦芽、肉豆蔻、决明子、薏苡仁、酸枣仁、大枣、远志、僵蚕、地龙、蜈蚣、全蝎、水蛭


附【通则2351】 黄曲霉毒素测定法

第一法

本法系用高效液相色谱法(通则0512)测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素(黄曲霉毒素B1 、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2 总量计),除另有规定外,按下列方法测定。

表1

项目

操作

色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-乙腈-水(40:18:42)为流动相;采用柱后衍生法检测,①碘衍生法:衍生溶液为0.05%的碘溶液(取碘0.5g,加入甲醇100ml使溶解,用水稀释至1000ml制成),衍生化泵流速每分钟0.3ml,衍生化温度70℃; ②光化学衍生法:光化学衍生器(254nm);以荧光检测器检测,激发波长λex = 360nm (或365nm),发射波长λex = 450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。

混合对照品溶液的制备

精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液(黄曲霉毒素B1 、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2 标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml)0.5ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,作为贮备溶液。精密量取贮备溶液1ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,即得。

供试品溶液的制备

取供试品粉末约15g(过二号筛),精密称定,置于均质瓶中,加入氯化钠3g,精密加入70%甲醇溶液75ml,高速搅拌2分钟(搅拌速度大于11000转/分钟),离心5分钟(离心速度2500转/分钟),精密量取上清液15ml,置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,量取续滤液20.0ml,通过免疫亲合柱,流速每分钟3ml,用水20ml洗脱,洗脱液弃去,使空气进入柱子,将水挤出柱子,再用适量甲醇洗脱,收集洗脱液,置2ml量瓶中,并用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。

测定法

分别精密吸取上述混合对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl,注入液相色谱仪,测定峰面积,以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标,绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液20~25μl,注入液相色谱仪,测定峰面积, 从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1 、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2 的量,计算,即得。

第二法

本法系用高效液相色谱-串联质谱法测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素(以黄曲霉毒素B1 、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2 总量计),除另有规定外,按下列方法测定。

项目

操作

色谱、质谱条件与系统适用性试验

 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以10mmol/L醋酸铵溶液为流动相A,以甲醇为流动相B;柱温25℃;流速每分钟0.3ml;按下表3中的规定进行梯度洗脱。

以三重四极杆串联质谱仪检测;电喷雾离子源(ESI),采集模式为正离子模式;各化合物监测离子对和碰撞电压(CE)见下表4。

系列混合对照品溶液的制备

精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液(黄曲霉毒素B1 、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2 的标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml)适量,用70%甲醇稀释成含黄曲霉毒素B2、G2浓度为0.04~3ng/ml,含黄曲霉毒素B1、G1浓度为0.12~10ng/ml的系列对照品溶液,即得(必要时可根据样品实际情况,制备系列基质对照品溶液)。

供试品溶液的制备

同第一法。

测定法

精密吸取上述系列对照品溶液各5μl,注入高效液相色谱-质谱仪,测定峰面积,以峰面积为纵坐标,进样浓度为横坐标,绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液5μl,注入高效液相色谱-串联质谱仪,测定峰面积,从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2的浓度,计算,即得。 


表3

时间(分钟)

流动相A(%)

流动相B(%)

0~4.5

6515

3585

4.5~6

150

85100

6~6.5

065

10035

6.5~10

65

35


黄曲霉毒素B1B2G1G2对照品的监测离子对、碰撞电压(CE)参考值

表4

编号

中文名

英文名

母离子

子离子

CE(V)

1

黄曲霉毒素G2

Aflatoxin G2

331.1

331.1

313.1

245.1

33

40

2

黄曲霉毒素G1

Aflatoxin G1

329.1

329.1

243.1

311.1

35

30

3

黄曲霉毒素B2

Aflatoxin B2

315.1

315.1

259.1

287.1

35

40

4

黄曲霉毒素B1

Aflatoxin B1

313.1

313.1

241.0

285.1

50

40


【附注】 

(1)本实验应有相应的安全、防护措施,并不得污染环境。 

(2)残留有黄曲霉毒素的废液或废渣的玻璃器皿,应置于专用贮存容器(装有10%次氯酸钠溶液)内,浸泡24小时以上,再用清水将玻璃器皿冲洗干净。 

(3)当测定结果超出限度时,采用第二法进行确认。


 

在线客服

  • 业务咨询
  • 业务咨询
  • 官方公众号
  • 咨询热线: 400-1166596 022-23857596